價(jià) 格：詢價(jià)
規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L
產(chǎn) 地：中國(guó)
貨 號(hào)：HQ220312001L
品 牌：匯研生物
為確保產(chǎn)品的性能和無(wú)憂的操作，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本手冊(cè)，有任何疑問(wèn)請(qǐng)咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見(jiàn)附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
Ni Focurose HPL（IMAC）是利用Ni2+與蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的某些氨基酸(主要為組氨酸、半胱氨酸、色氨酸)相互作用而進(jìn)行分離純化，適用于His標(biāo)簽蛋白及與Ni2+具有相互作用的大生物分子的分離純化。
特點(diǎn)：
a.快速、簡(jiǎn)單（一步純化）。
b.使用范圍廣、操作簡(jiǎn)單，適合重力柱和預(yù)裝柱（蠕動(dòng)泵或者層析系統(tǒng)）。
c.多重選擇，可以螯合各種金屬離子進(jìn)行使用（例如Cu2+、Zn2+、Fe2+、Co2+、Ca2+等）。
d.相對(duì)于IDA Focurose HPL 來(lái)說(shuō)，Ni2+脫落低、試劑兼容性廣（見(jiàn)表2）。
e.大孔微球，生物大分子樣品載量較高。
備注：當(dāng)螯合Ca2+時(shí)，避免使用磷酸鹽緩沖液（會(huì)形成沉淀）。
表1：Ni Focurose FF（IMAC）性能參數(shù)
基質(zhì) | 高剛性瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | ≈75μm |
結(jié)合載量 | ≥25mg(His標(biāo)簽蛋白)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性* | 3-12(長(zhǎng)期) 2-14(短期) |
化學(xué)穩(wěn)定性** | 所有常用水溶液和緩沖液 避免使用螯合劑（例如EDTA、EGTA）和還原劑（例如DTT和DTE） |
流速 | 300cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
*：此處穩(wěn)定性指的是在未螯合金屬離子時(shí)介質(zhì)的穩(wěn)定性。
表2：常用試劑兼容性
緩沖液 | 0.05M sodium phosphate, pH 7.4 0.1M Tris-HCl, pH 7.4 0.1M Tris-acetate, pH 7.4 0.1M HEPES, pH 7.4 0.1M MOPS, pH 7.4 0.1M sodium acetate, pH 4 |
變性劑 | 8M Urea 6M Gua-HCl |
去污劑 | 2% Triton X-100 2% Tween 20 2% NP-40 2% Cholate 1% CHAPS |
還原劑* | 0.005M DTE 0.005M DTT 0.02M β-mercaptoethanol 0.005M TCEP 0.01M reduced glutathione |
其它添加劑 | 0.5M Imidazole 20% Ethanol 50% Glycerol 0.1M Na2SO4 1.5M NaCl 0.001M EDTA** 0.06M Citrate |
2.溶液制備
平衡液：0.02M PB、0.5M NaCl、0.02-0.04M Imidazole，pH 7.4。
洗脫液：0.02M PB、0.5M NaCl、0.5M Imidazole，pH 7.4。
備注：當(dāng)純化包涵體時(shí)，溶液中要添加8M Urea或6M Gua-HCl。
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。
3.2樣品過(guò)濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過(guò)濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過(guò)濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過(guò)濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
采用液滴對(duì)液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)或蠕動(dòng)泵或注射器上。
4.2 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
4.3 用洗脫液以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
4.4 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
4.5 將樣品以5ml/min的流速上樣。
4.6 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個(gè)CV）。
4.7 用洗脫液以5ml/min的流速洗脫5CV或20CV(階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
5.再生（以XK16/10為例）
5.1用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
5.2用剝離液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
5.3 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
5.4 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
5.5 用0.1M NiSO4以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
5.6 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
5.7 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
5.8 用20%乙醇以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
備注：剝離液，0.02M PB、0.5M NaCl、0.05 EDTA，pH 7.4。
6.清洗（以XK16/10為例）
6.1 參照5.1-5.4操作將Ni2+剝離。
6.2 用1.5M NaCl以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
6.3 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
6.4 用1.0M NaOH以2.5ml/min的流速?zèng)_洗30個(gè)CV。
6.5 用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
6.6 用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
6.7 用30%異丙醇以2.5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
6.8 參照5.4-5.8操作將Ni2+螯合。
7.常見(jiàn)問(wèn)題
表3：常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過(guò)載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過(guò)快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集影響結(jié)合 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.表達(dá)條件過(guò)于劇烈,His標(biāo)簽被包裹，不能與介質(zhì)結(jié)合 | 建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對(duì)照，確定表達(dá)條件是否合適 | |
5.初始樣品中沒(méi)有組氨酸標(biāo)簽蛋白 | 通過(guò)基因序列或His標(biāo)簽抗體核實(shí) | |
6.目標(biāo)蛋白出現(xiàn)在流穿中 | 目標(biāo)蛋白沒(méi)有成功表達(dá)或樣品與平衡液中pH及組分不正確 | |
洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒(méi)有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫條件不合適 | 加大洗脫液中咪唑濃度 | |
3.洗脫時(shí)間不夠 | 降低流速，延長(zhǎng)洗脫液的保留時(shí)間 | |
4.洗脫體積過(guò)小 | 加大洗脫體積 | |
5.洗雜時(shí)，目的蛋白被洗下來(lái) | 降低洗雜液中的咪唑濃度 | |
6.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測(cè)目標(biāo)物在洗脫液條件（pH和鹽濃度）下的溶解度和穩(wěn)定性。可以嘗試在洗脫液中加入一些添加劑：如0.2% Triton X-100或0.5% Tween 20 | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾 |
2.樣品粘度過(guò)高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚档驼扯取?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
5.雜質(zhì)與Ni2+具有較高的親和力。 | 用其它類型介質(zhì)進(jìn)行純化（如離子或分子篩） | |
6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解 | 檢測(cè)目標(biāo)物的穩(wěn)定性并加入蛋白酶抑制劑 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購(gòu)買 | |
8.雜質(zhì)與介質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附 | 適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附,可以嘗試在樣品中加入一些添加劑：如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油 | |
9.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積 | 重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長(zhǎng) | 介質(zhì)使用完后，請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過(guò)快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時(shí)清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過(guò)多 | 更換新介質(zhì) | |
4.表達(dá)條件過(guò)于劇烈,His標(biāo)簽被包裹，不能較好與介質(zhì)結(jié)合 | 建議做一個(gè)空載體作為表達(dá)和純化的對(duì)照，確定表達(dá)條件是否合適 | |
色譜峰上升過(guò)陡 | 介質(zhì)裝填過(guò)緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過(guò)緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率 | |
3.分離柱中微生物生長(zhǎng) | 所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過(guò)濾 |
8.訂購(gòu)信息
表4：訂購(gòu)信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
Ni Focurose HPL（IMAC） | 25ml | HQ220312025M |
Ni Focurose HPL（IMAC） | 100ml | HQ220312100M |
Ni Focurose HPL（IMAC） | 500ml | HQ220312500M |
Ni Focurose HPL（IMAC） | 1L | HQ220312001L |
Ni Focurose HPL（IMAC） | 5L | HQ220312005L |
Ni Focurose HPL（IMAC） | 20L | HQ220312020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購(gòu)買，請(qǐng)咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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