為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
CNBr Focurose 4FF是經(jīng)過溴化氰活化后含有氰酸酯基團(tuán)的快流速純化介質(zhì)，適用于偶聯(lián)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫(yī)藥純化工藝中經(jīng)過反復(fù)的驗(yàn)證，得到了廣泛的應(yīng)用。
特點(diǎn)：
a.應(yīng)用廣泛，可適用于偶聯(lián)含氨基的生物類大分子。
b.多點(diǎn)偶聯(lián)，簡單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩(wěn)定性。
c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。
表1：介質(zhì)性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
結(jié)合載量 | 25-40mg(Trypsinogen)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性* | 3-11（長期） 2-11（短期） |
流速 | ≧250cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 100%丙酮 |
貯存溫度 | 4-8℃ |
*：穩(wěn)定性取決于偶聯(lián)的配基
2.溶液制備
A液：0.001M HCl。
B液：0.1M NaHCO3、0.5M NaCl，pH 8.3。
C液：0.1M Tris-HCl，pH 8.0。
D液：0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl，pH 9.0。
E液：0.1M 乙酸鈉、0.5M NaCl，pH 3.0。
F液：20%乙醇。
G液：0.02M Na2HPO4、0.5M NaCl， pH 7.0-7.4。
H液：0.1M Glycine-HCl，pH 2.7。
I液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。
3.樣品制備
3.1按0.5-10mg/ml的濃度將待偶聯(lián)樣品溶解在B液中，也可以采用透析/超濾/G25將待偶聯(lián)樣品置換到B液中。
3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.偶聯(lián)流程
4.1取所需量的介質(zhì)勻漿液至相應(yīng)規(guī)格的砂芯漏斗中抽干。
4.2加入2倍介質(zhì)體積的預(yù)冷A液，攪拌均勻后抽干；重復(fù)2次。
4.3將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的反應(yīng)器中。
4.4將待偶聯(lián)樣品加入到反應(yīng)器中，室溫條件下溫和攪拌約4h。
4.5將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干，保存收集容器中偶聯(lián)后的溶液。
4.6加入2倍介質(zhì)體積的C液，攪拌均勻后抽干；重復(fù)2次。
4.7將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的反應(yīng)器中, 加入2倍介質(zhì)體積的C液, 室溫條件下溫和攪拌約4h。
4.8將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干。
4.9加入2倍介質(zhì)體積的D液, 攪拌均勻后抽干。
4.10加入2倍介質(zhì)體積的E液, 攪拌均勻后抽干。
4.11重復(fù)“4.9-4.10”2次。
4.12加入2倍介質(zhì)體積的F液, 攪拌均勻后抽干；重復(fù)2次。
4.13將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的容器中，加入等體積的F液后保存?zhèn)溆谩?/span>
5.偶聯(lián)效率測定
測定偶聯(lián)前后溶液中樣品含量（A280），計(jì)算偶聯(lián)效率。
6.純化流程（以XK16/10為例）
6.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
6.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。
6.3用G液以5ml/min的流速沖洗10個CV。
6.4將樣品以5ml/min的流速上樣。
6.5用G液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個CV）。
6.6用H液以5ml/min的流速洗脫10CV。
6.7用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。
6.8用F液以5ml/min的流速沖洗5個CV。
7.清洗（取決于待偶聯(lián)樣品的穩(wěn)定性）
7.1用6M鹽酸胍沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。
7.2用70%乙醇沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。
7.3用F液沖洗10CV。
8.常見問題
表2：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
偶聯(lián)效率較低 | 1.B液鹽濃度或pH不對 | 檢測B液配制是否正確 |
2.偶聯(lián)時間不夠 | 延長偶聯(lián)時間 | |
3.預(yù)活化填料不合適 | 嘗試其它種類的預(yù)活化填料 | |
純化時目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時有效地清洗介質(zhì) | |
4.樣品在儲存或上樣過程中失活 | 正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性 | |
5.配基和目標(biāo)物結(jié)合比例比較低 | 嘗試加大偶聯(lián)時配基濃度 | |
6.配基在偶聯(lián)或清洗過程中降解 | 檢測配基在偶聯(lián)或清洗中的穩(wěn)定性 | |
洗脫時沒有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 降低上樣流速并檢查介質(zhì)的結(jié)合能力 |
2.洗脫條件不合適 | 更改相應(yīng)洗脫條件或增強(qiáng)洗脫液的洗脫能力 | |
3.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測目標(biāo)物在洗脫液條件（鹽濃度和pH等）下的穩(wěn)定性 | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚档驼扯取?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳，洗脫流速太快、梯度太陡。 | 優(yōu)化洗脫條件 | |
6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解 | 檢測目標(biāo)物的穩(wěn)定性 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附 | 適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附 | |
9.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后，請及時正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多，配基出現(xiàn)脫落 | 重新偶聯(lián)新的介質(zhì) | |
4.樣品在儲存或上樣過程中失活，不能較好的與配基結(jié)合 | 正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性 | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢
| 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質(zhì)或?yàn)V膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過濾 |
9.訂購信息
表3：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
CNBr Focurose 4FF | 5ml | HQ03030105M |
CNBr Focurose 4FF | 25ml | HQ030301025M |
CNBr Focurose 4FF | 100ml | HQ030301100M |
CNBr Focurose 4FF | 500ml | HQ030301500M |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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