為確保產品的性能和無憂的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術支持或當地的銷售人員（聯系方式見附錄）。
1.產品介紹
Phenyl Focurose FF（LS）偶聯的疏水性配基在高離子強度條件下（高離子強度會增加配基和疏水性基團的相互作用）可以與蛋白質或抗體表面的一些疏水性基團進行相互作用，從而達到分離純化的目的。Phenyl Focurose FF（LS）主要用于初始樣品的捕獲和中度純化。
特點：
a.快速、簡單（一步純化）。
b.與反相層析相比，疏水作用層析介質上的配基濃度低，洗脫條件溫和，有助于保持分子的生物活性。
c.應用廣，可以單獨進行初期捕獲、中度純化，又可以和離子交換介質組合使用。
d.高載量。
表1：性能參數
基質 | 高度交聯6%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
配基濃度 | ≈20umol/ml（介質） |
pH穩(wěn)定性 | 2-14（短期） 3-13（長期） |
化學穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖溶液，1M乙酸、1M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍、30%異丙醇、70%乙醇 |
流速 | ≧300cm/h |
貯存溶液 | 20% 乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
表2：影響疏水層析的因素
影響因素 | 作用機理 | 處理建議 |
配基結構 | 不同的配基與蛋白的結合能力強弱不同 | 建議預實驗篩選合適的介質 |
配基濃度 | 配基濃度越高結合能力越強 | 建議預實驗選擇最優(yōu)配基濃度 |
樣品性質 | 蛋白質的疏水性強弱取決于其表面疏水基團的分布 | / |
鹽的濃度 | 鹽濃度越高，配基和蛋白質結合的越牢固，但過高的鹽濃度會導致蛋白沉淀 | 檢測不同鹽濃度下蛋白的溶解性和穩(wěn)定性 |
鹽的種類 | 不同類型的鹽會產生不同的結合效果 | 優(yōu)先選擇(NH4)2SO4和NaCl |
溫度 | 溫度越高，蛋白疏水性越強 | 必須要維持同樣的溫度，建議維持室溫 |
pH | 過高的或過低的pH會影響蛋白質的溶解性和穩(wěn)定性，并且pH會影響結合效果 | 在保證蛋白的溶解性和穩(wěn)定的前提下，建議pH范圍在5.0-8.5 |
2.溶液制備
平衡液：0.05M PB、1.70M (NH4)2SO4，pH 7.0。
洗脫液：0.05M PB，pH 7.0。
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進行稀釋、透析/超濾/G25進行緩沖液置換。
3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗5CV（CV指柱床體積，下同）。
用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5CV。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
將樣品以5ml/min的流速上樣。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據前期篩選實驗數據，采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
用純化水以5ml/min的流速沖洗5CV。
5.放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注：若實際情況和實驗室數據有偏差，可以維持停留時間不變。
6.維護
6.1平衡
柱子裝填完成后，用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導和pH值恒定。
6.2再生
每次分離純化后，用純化水以60cm/h的流速沖洗5CV。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質，例如脂類、沉淀物、變性蛋白。
a.沉淀物
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
b.脂類、強疏水蛋白。
用1.0M NaOH，30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
6.5滅菌
將介質置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進行高壓滅菌。
6.6保存
介質在20%乙醇中4-30℃保存。
7.常見問題
表3：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時目標物不與介質結合 或結合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.雜質蛋白或脂類在介質中聚集 | 及時有效地清洗介質或更換新的介質 | |
4.平衡液中鹽濃度較低或目標物疏水性較弱 | 加大平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類或更換結合能力更強的疏水介質 | |
洗脫時沒有收集到目標物 或只收集到少量目標物 | 1.目標物沒有與介質結合或結合量較少 | 先確認目標物是否與介質結合 |
2.洗脫時間不夠 | 降低流速，延長洗脫液的保留時間 | |
3.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
4.目標物和介質結合強度太高 | 降低平衡液中鹽濃度或更換鹽的種類或或更換結合能力較弱的疏水介質在洗脫液中加入添加劑（少量去污劑或者低濃度有機試劑） | |
目標物純度較低
| 1.樣品沒有經過前處理 | 樣品上柱前必須要經過離心或過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當的稀釋樣品，降低粘度。 | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質蛋白或脂類在介質中聚集沉淀 | 及時有效地清洗介質 | |
5.洗脫條件不佳，洗脫流速太快、梯度太陡。 | 優(yōu)化洗脫條件 | |
6.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
7.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
8.介質選擇性不合適 | 篩選合適的疏水介質 | |
9.介質中有微生物生長 | 介質使用完后，請及時正確保存介質 | |
介質載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.雜質蛋白或脂類在介質中聚集，導致載量下降。 | 及時清洗介質 | |
3.使用次數過多，配基被氧化或脫落 | 及時清洗介質或更換新介質 | |
色譜峰上升過陡 | 介質裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質或濾膜 |
2.目標物沉淀在介質中 | 調整平衡液和洗脫液組分，以維持目標物的穩(wěn)定性 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經過過濾和脫氣、樣品上柱前必須離心或過濾 |
8.訂購信息
表4：訂購信息表
產品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Phenyl Focurose FF（LS） | 25ml | HS060301025M |
Phenyl Focurose FF（LS） | 100ml | HS060301100M |
Phenyl Focurose FF（LS） | 500ml | HS060301500M |
Phenyl Focurose FF（LS） | 1L | HS060301001L |
Phenyl Focurose FF（LS） | 5L | HS060301005L |
Phenyl Focurose FF（LS） | 20L | HS060301020L |
備注：大規(guī)格包裝產品或其它產品購買，請咨詢本公司當地銷售或售前技術支持。
地址：武漢市東湖開發(fā)區(qū)高新二路388號光谷國際生物醫(yī)藥企業(yè)加速器C11棟20層
電話：027-87772229
郵箱：huiyanbio@126.com
微信公眾號
匯研手機站
客服1
